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GoldBio D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明書(shū)

 更新時(shí)間:2024-04-08 點(diǎn)擊量:1416

一、GoldBio熒光素原液(GLSS)的制備

1.在分子生物學(xué)級(jí)H2O中制備15 mg/mL(100X)GLSS。

a.為了獲得最佳結(jié)果,應(yīng)立即使用GLSS,但可能會(huì)將其分離分成小份,在-80°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)1個(gè)月。

2.螢光素酶發(fā)光中螢光素底物GLSS的最終濃度

含量測(cè)定應(yīng)為:150μg/ml(熒光素-K為471μM,熒光素Na為468μM)。

二、GoldBio螢光素酶測(cè)定緩沖液(TMCA)的制備

在合并到TMCA中之前,將所有試劑作為分子級(jí)H2O中的儲(chǔ)備溶液進(jìn)行制備。

1.準(zhǔn)備一份500mM的MgCl2(100x)溶液。

a.稱取476.05 mg(95.21 g/mol)MgCl2并溶解在10 ml H2O中。

b.溶液可儲(chǔ)存在RT。

2.制備25mM CoA(100x)溶液。

a.稱取191.88 mg(767.53 g/mol)CoA并溶解在10 ml H2O中。

b.通過(guò)過(guò)濾器抽取5-10 ml H2O,制備0.2µm過(guò)濾器。

c.通過(guò)預(yù)濕過(guò)濾器對(duì)100x CoA進(jìn)行滅菌,并在-20°c下儲(chǔ)存。

3.制備15mM ATP(100x)溶液。

a.稱取82.67 mg(551.14 g/mol)ATP并溶解在10 ml H2O中。

b.在-20°C下儲(chǔ)存。

4.制備400mM Tris-HCl,pH 7.8(4x)緩沖液。

a.稱取4.85 g(121.14 g/mol)Tris堿并溶解在85 ml H2O中。

b.用1M HCl調(diào)節(jié)pH至pH 7.8,并用H2O將體積調(diào)至100 ml。

5.在室溫下準(zhǔn)備新鮮的2倍TMCA原料。

a.計(jì)算實(shí)驗(yàn)所需的TMCA;將所有組件合并為2倍

工作濃度(在H2O中)(隨后在熒光素酶測(cè)定中降低到1x)。

示例:對(duì)于1 ml TMCA(2x):500µl Tris-HCl(4x原液)20µl MgCl2(100倍庫(kù)存) 20µl CoA(100倍庫(kù)存)

20µl ATP(100倍庫(kù)存)用H2O將體積調(diào)至1 ml。

b.如有必要,您可以在此時(shí)加入其他成分(即DTT、EDTA)。

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